实验十一 DNA的粗提取与鉴定

实验十一 DNA的粗提取与鉴定

第六章 遗传和变异

实验十一  dna的粗提取与鉴定教学目的
　　1、初步掌握dna的粗提取和鉴定的方法
　　2、观察提取出来的dna物质实验原理
　　1、dna在nacl溶液中的溶解度，是随着nacl的浓度的变化而改变的。当nacl的物质的量浓度为0.14mol/l时,dna的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在nacl溶液中的dna析出。
　　2、dna不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的dna。
　　3、dna遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定dna的试剂。注意事项
　　1、步骤3析出含dna的黏稠物中，蒸馏水要沿烧杯内壁缓缓加入，不能一次快速倒入。
　　2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，但是在不同的步骤中玻璃棒的用法不同。
实验用具
　　鸡血细胞液（5～10ml）；体积分数为95％的冷酒精，蒸馏水，质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液，物质的量浓度分别为2mol/l和0.015mol/l的nacl溶液，二苯胺试剂；烧杯（100ml，1个， 50ml， 500ml，各2个），漏斗，试管（20ml，2个），玻璃棒，滴管，量筒（100ml，1个），纱布，镊子，滤纸，铁架台，铁环，三角架，酒精灯，石棉网，载玻片，试管夹。
课时安排　一课时
课前准备
    制备鸡血细胞液，方法是：将质量浓度为0.1g/ml的柠檬酸钠溶液100ml，置于500ml烧怀中，注入新鲜的鸡血（约180ml），用玻璃棒搅拌，使其充分混合，以免凝血。静置于冰箱内一天，使血细胞自行沉淀。也可以用离心机离心2 min（转速1000转/分）。用吸管吸去上清液。
板书

实验十一 dna的粗提取与鉴定实验原理
    1、析出溶解在nac1溶液中的dna。
    2、用冷酒精提取出含杂质较少的dna。
    3、dna在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤：
　　1、提取鸡血细胞的细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。 5 min
　　2、溶解细胞核内的dna
　　3、析出含dna的黏稠物：蒸馏水300ml，逆时针方向搅拌，缓慢
　　4、过滤：取黏稠物
　　5、再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3 min
　　6、过滤：取滤液。
　　7、提取出含杂质较少的dna，逆时针方向搅拌，稍慢。5 min
　　8、dna的鉴定：沸水浴5min（（1）无变化（2）蓝色）上节课我们通过几个验证性实验，证明了dna是主要的遗传物质。那么dna是什么样的物质呢？今天我们就通过实验将它提取出来，进行观察和鉴定。
　  通过预习，我们知道选用鸡血细胞液作为实验材料。在制备鸡血细胞液时，所用的柠檬酸钠有防止血液凝固的作用。　　制备过程中，一定要用刚宰杀的鸡的新鲜血，并且要与抗凝剂充分混合，防止凝血。我们采用静置一天的方法，获得鸡血细胞液。
　　大家在动手做实验之前先要明确几个需要注意的问题。
　　1、要严格按照实验指导的方法步骤去操作。
　　2、实验中有多个步骤都要用玻璃棒进行搅拌，使用时玻璃棒不要碰到烧杯底，在不同的步骤中玻璃棒的用法不同，每一步的用法参照黑板上的指导去操作。
　　3、在dna的鉴定中，所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，大家在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。